使用UV法應(yīng)注意以下環(huán)節(jié)：
1 儀器的校正和檢定：
1．1 波長 由于溫度變化對機(jī)械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應(yīng)定期對所用的儀器進(jìn)行**校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。
1．2 吸收度 吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。
1．3 狹縫寬度 選擇儀器的狹縫寬度，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對于《中藥典》UV法測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低。
1．4 天平和玻璃儀器的檢定所用的容量儀器及分析天平應(yīng)經(jīng)過檢定，如有偏差應(yīng)加上校正值。
1．5 吸收池配對 石英吸收池對紫外光亦有吸收，1 em的吸收池在波長220～270 nm的范圍內(nèi)，以空氣作為，其透光率往往小于，同時每個吸收池不可能*相同，故在每次測定前應(yīng)做吸收池配對試驗(yàn)。方法是取干燥潔凈的吸收池，均裝入測定用空白溶劑，以只吸收池作空白，用測定時所用的波長測定其他吸收池的吸收度，后選擇吸收小的只作為配對，測定并記錄下其它吸收池的吸收度，供試品液的實(shí)際吸收度應(yīng)是與吸收池(有空白溶劑時)吸收度之差。為減少誤差，常用個配對杯測定若干樣品(也減少計算麻煩)，但應(yīng)注意換液時充分洗滌。
2 對溶劑的要求：由于溶劑與溶質(zhì)分子間形成氫鍵、偶化等的影響，可以使溶質(zhì)吸收波長發(fā)生位移。通常性溶劑比非性溶劑的影響大，在選擇溶劑時應(yīng)予以注意。測定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否有吸收峰，是否影響供試品測定。每次測定時應(yīng)采用同廠、同批號的試劑配制混合均勻的同批溶劑。
3 檢驗(yàn)： 3．1 溶液配制 稱量應(yīng)按藥典規(guī)定進(jìn)行。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時所取容積般應(yīng)不少于5mL。含量測定供試品應(yīng)稱取2份，如為對照品比較法，對照品也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份，平行操作。每份結(jié)果對平均值的偏差應(yīng)在4-0.5％以內(nèi)。作鑒別或檢查時可取樣品1份。
3．2 測定 除另有規(guī)定外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰波長4-2 nm以內(nèi)，再測試幾個點(diǎn)的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰**長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長4-1nm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度。取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。樣品溶液的量以池體積的4／5為宜，使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時應(yīng)注意每次放入的方向相同。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存。吸收池如污染不易洗凈時可用發(fā)煙硫酸+硝酸(3：1 )混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學(xué)表面，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。
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